細胞培養(yǎng)技術服務
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服務編碼
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項目名稱
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項目報價
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項目周期
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BT5001
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細胞培養(yǎng)
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2000元
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1-2周
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BT5002
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細胞瞬時轉染
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3000元
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1-2周
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BT5003
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穩(wěn)定細胞系構建
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咨詢
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咨詢
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一、服務內容
1、細胞轉染和穩(wěn)定表達細胞株篩選
通過轉染試劑或電穿孔方式等方式，將目的基因導入貼壁細胞或懸浮細胞24-48小時后，目的基因即在細胞內表達。此時為了建立穩(wěn)定細胞系，可根據(jù)不同基因載體中所含的抗性標記，選用相應的藥物對靶細胞進行篩選，從而得到穩(wěn)定表達外源基因的細胞克隆。觀察目的基因及其表達蛋白在某種細胞中的功能（短時間即可進行觀察，但效應會很快丟失）。
2、針對不同種類細胞使用藥物，低氧，壓力等外源因素進行刺激等處理，建立相關的細胞模型，從而進行后續(xù)的研究工作。
二、樣品要求（樣品處理及保存見附件）
1干冰運輸：取對數(shù)生長期的細胞，消化后低速離心1000rpm，5min收集細胞，加入適量配制好的凍存液后吹打均勻。將細胞分裝入凍存管中，標明細胞的名稱、細胞代次、凍存時間及操作者；放4℃冰箱30min，-20℃30min到1h，-80℃過液，然后放入液氮罐；細胞數(shù)目不少于5×106/ml；
2常溫運輸：細胞貼壁覆蓋瓶底面積達40%以上時，裝滿培養(yǎng)液，瓶口用封口膜封好，裝入盒子，盒子里用泡沫或棉花塞滿，讓瓶子固定在盒子中。
三、服務特點
1、針對不同細胞系篩選合適的轉染試劑和質粒濃度配比，提高轉染效率和蛋白表達量
2、豐富的抗生素篩選經驗和單細胞克隆鑒定方法提高實驗效率
3、構建的穩(wěn)定表達細胞株可穩(wěn)定傳代，極少發(fā)生性狀丟失
四、收費標準
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服務項目
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收費標準￥
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實驗周期
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蛋白瞬時表達或敲低
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基因表達或敲低載體構建
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請參見載體構建目錄
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2-3周
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質粒大提（含去內毒素）
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700/質粒
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1周
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載體轉染
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3000/樣品
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1周
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Western Blot檢測蛋白表達或敲低
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2000/目的蛋白/膜
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2周
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蛋白穩(wěn)定表達細胞株構建（混合克隆）
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表達載體構建
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請參見載體構建目錄
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2-3周
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質粒大提（含去內毒素）
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700/質粒
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1周
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轉染和抗生素篩選
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40000/細胞系
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3-4周
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Western Blot檢測穩(wěn)定細胞株蛋白表達
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2000/目的蛋白/膜
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2周
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蛋白穩(wěn)定表達細胞株構建（單克?。?/span>
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表達載體構建
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請參見載體構建目錄
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2-3周
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質粒大提（含去內毒素）
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700/質粒
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1周
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轉染和抗生素篩選
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50000/細胞系
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6-8周
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Western Blot檢測穩(wěn)定細胞株蛋白表達
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2000/目的蛋白/膜
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2周
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蛋白敲低細胞系構建（單克?。?/span>
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shRNA表達載體的構建
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請參見載體構建目錄
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2-3周
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質粒大提（含去內毒素）
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700/質粒
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1周
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轉染和抗生素篩選
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60000/細胞系
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6-8周
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Western Blot檢測敲低細胞株蛋白表達
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2000/目的蛋白/膜
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2周
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蛋白真核表達（分泌表達）
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分泌型表達載體的構建
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請參見載體構建目錄
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2-3周
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質粒大提（含去內毒素）
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700/質粒
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1周
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細胞轉染
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3000/質粒
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2周
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蛋白表達檢測（Western Blot或 ELISA）
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2000/目的蛋白/膜；600/板
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2周
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蛋白表達和純化
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20000/mg
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2周
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五、客戶提供材料
1、待克隆基因和載體信息，待敲低基因信息和shRNA序列信息（如無相關shRNA序列信息，本公司可代為設計并收取相關費用）；
2、待轉染細胞株（如需使用常用腫瘤細胞株，如293/293T、HeLa等可由本公司提供）；
3、陽性對照樣品（盡量提供）
4、相關文獻（可選）
六、提交給客戶結果
1、構建完成的載體和甘油菌株；
2、完整測序報告和序列堿基圖
3、載體真核表達鑒定結果
4、載體真核表達蛋白
5、穩(wěn)定表達細胞株>1×107
6、穩(wěn)定敲低細胞株>1×107
7、完整實驗報告（包括基因擴增圖，細胞株過表達和敲低檢測結果圖等）
