人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的接種培養(yǎng)

細(xì)胞接種培養(yǎng)

　　1、細(xì)胞接種：

　?。?）、包被液：用去離水配制0.5%明膠溶液，過濾除菌。

　?。?）、人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)瓶包被：取2-4個(gè)T25培養(yǎng)瓶，每個(gè)培養(yǎng)瓶加2－3ml0.5%明膠溶液，搖勻使包被液布滿培養(yǎng)瓶底面，置37℃2小時(shí)或放置過夜。

　?。?）、接種細(xì)胞：人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞接種前吸凈包被液，按2500－5000個(gè)細(xì)胞/cm接種細(xì)胞（1支5×10個(gè)細(xì)胞可接種2-4個(gè)培養(yǎng)瓶），每瓶加培養(yǎng)液3-5ml,搖勻后置37℃5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)，此時(shí)細(xì)胞已完全貼壁，更換培養(yǎng)液后繼續(xù)在37℃5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

　　（4）、擴(kuò)大培養(yǎng)：一般每周更換培養(yǎng)液2次，至細(xì)胞長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)面的70-80%可進(jìn)行傳代或凍存。

細(xì)胞凍存

　　調(diào)整細(xì)胞數(shù)2-5×10個(gè)/ml，按含細(xì)胞的RPMI-1640液ml數(shù)，配制等量的凍存液。凍存液中FBS占80%，DMSO占20%。例：含細(xì)胞的RPMI-1640液為8ml，應(yīng)配凍存液8ml，其中FBS為6.4ml,DMSO為1.6ml，混勻。置細(xì)胞懸液于冰浴中，逐滴加入凍存液，邊加邊搖動(dòng)。加完后用吸管吹打混勻。于冰浴中分裝細(xì)胞于凍存管中，1.8ml/管，再將凍存管置于凍存盒內(nèi)置-80℃冰箱，24小時(shí)后轉(zhuǎn)入液氮中保存。

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