shRNA慢病毒載體

慢病毒表達(dá)載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)粒可提供所有的轉(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞.

慢病毒表達(dá)載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)?？商峁┧械霓D(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，在細(xì)胞中進(jìn)行病毒的包裝，包裝好的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中，離心取得上清液后，可以直接用于宿主細(xì)胞的感染，目的基因進(jìn)入到宿主細(xì)胞之后，經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄，整合到基因組，從而高水平的表達(dá)效應(yīng)分子。

載體的技術(shù)特點(diǎn)

1、大大提高對于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞， 如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞等轉(zhuǎn)導(dǎo)效率

2、快速獲得高水平的表達(dá)

3、目的基因整合到宿主細(xì)胞基因組的幾率大大增加

4、將免疫反應(yīng)降到*低

5、能夠插入大的片段(~7.5 kb)

6、能夠應(yīng)用于干細(xì)胞研究

7、*低的細(xì)胞毒性

慢病毒表達(dá)系統(tǒng)

本公司使用的慢病毒表達(dá)系統(tǒng)，它由三部分組成：慢病毒表達(dá)載體、慢病毒包裝質(zhì)粒、可產(chǎn)生假病毒顆粒的細(xì)胞系。

慢病毒表達(dá)載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)粒可提供所有的轉(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，在細(xì)胞中進(jìn)行病毒的包裝，包裝好的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中，離心取得上清液后，可以直接用于宿主細(xì)胞的感染，目的基因進(jìn)入到宿主細(xì)胞之后，經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄，整合到基因組，從而高水平的表達(dá)效應(yīng)分子。

慢病毒介導(dǎo)的 siRNA活體實(shí)驗(yàn)用病毒液服務(wù)流程

對于活體 RNAi實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，SYNTHBIO公司可以為您生產(chǎn)高質(zhì)量的病毒液，服務(wù)流程如下：

根據(jù)目的基因相關(guān)信息（序列，序列號等），利用高效的設(shè)計(jì)軟件，設(shè)計(jì) siRNA序列，針對每條目的基因，我們設(shè)計(jì)4條siRNA序列，其中1條序列為陰性對照組；

根據(jù)設(shè)計(jì)好的 siRNA序列，設(shè)計(jì)，合成兩條互補(bǔ)的短片段的DNA；

對合成好的 DNA片段進(jìn)行稀釋，退火，連接到線形化處理過的載體，轉(zhuǎn)化，涂平板，過夜培養(yǎng)；

通過 PCR的方法篩選陽性菌落，進(jìn)行測序，分析測序結(jié)果；

對于測序正確的重組質(zhì)粒，提取和純化高質(zhì)量的不含內(nèi)毒素的 siRNA病毒穿梭質(zhì)粒；

利用構(gòu)建好的質(zhì)粒做轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)， 48小時(shí)后通過實(shí)時(shí)熒光定量和Western的方法分析目的基因，篩選出一條*有效的siRNA序列；

篩選出的高效重組載體和病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染 293T細(xì)胞，進(jìn)行病毒包裝和生產(chǎn)，收集病毒液；

濃縮、純化病毒液，測定滴度；

提供高質(zhì)量的病毒液給客戶（對于活體實(shí)驗(yàn)，我們建議的病毒基本單位為 1×10^9TU/ml ，對于小鼠尾靜脈給藥建議50~100ul/只）

Lentiviral shRNA的基因沉默效率

Lentiviral shRNA 抑制生長導(dǎo)管形成

Lentiviral shRNA 引起的表型變化

即用型Lentivirus shRNA構(gòu)建包裝服務(wù)

Lentivirus shRNA服務(wù)特點(diǎn)：

1、適用于原代培養(yǎng)細(xì)胞，難以轉(zhuǎn)染的各種細(xì)胞

2、可用于制備多種穩(wěn)定沉默特定基因的細(xì)胞株

3、您通過********** SupersilencingTM Vector方法篩選到有效的的基因沉默靶點(diǎn)，如果您需要構(gòu)建慢病毒載體來滿足實(shí)驗(yàn)需求

Lentivirus shRNA載體

********** Supersilencing Vector 干擾載體

包裝載體：Helper vector-I

Helper vector-II

Helper vector-III

提高包裝效率和對特定細(xì)胞的感染力,提高生物**性

品質(zhì)保證

客戶自己提供的序列委托我們制備的病毒顆粒，我們確保制備的病毒顆粒攜帶片段的正確性，確保病毒顆粒的總數(shù)和病毒顆粒的滴度達(dá)到合同規(guī)定的要求。

siRNA高效表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建

1. 通過專業(yè)設(shè)計(jì)人員的精心篩選獲得欲篩選的siRNA序列。

2. 設(shè)計(jì)siRNA 正義、反義鏈，選擇相應(yīng)loop結(jié)構(gòu)，加上酶切位點(diǎn)的目的序列。

3. 合成相應(yīng)的DNA序列，然后克隆于相應(yīng)的慢病毒表達(dá)載體。

4. 將載體轉(zhuǎn)化到宿主菌中進(jìn)行克隆、篩選，得到質(zhì)粒重組體即siRNA表達(dá)載體。

5. siRNA表達(dá)載體在真核細(xì)胞中可產(chǎn)生siRNA，從而在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生特定基因的沉默效果。此方法是多種siRNA制備方法中唯壹可以進(jìn)行長期基因沉默研究的方法。

本公司為您提供siRNA高效表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建服務(wù)。構(gòu)建好的siRNA表達(dá)載體，可直接用于轉(zhuǎn)染細(xì)胞進(jìn)行RNA干擾操作。

服務(wù)要求

1. 通過E-mail發(fā)送訂單，告知選定的相應(yīng)的基因信息，待構(gòu)建的靶點(diǎn)信息。靶基因在NCBI數(shù)據(jù)庫中的Gene ID、Accession No.

2. 我們可為您免費(fèi)設(shè)計(jì)siRNA序列.

訂購流程

1. 請用E-mail或者電話聯(lián)系SYNTHBIO公司。E-mail:info@synthbio.cn;Tel:0551-68788198。

2. 根據(jù)客戶提供的基因信息設(shè)計(jì)siRNA序列，并由客戶確認(rèn)。

3. 根據(jù)客戶提供的siRNA序列信息或經(jīng)客戶確認(rèn)的siRNA序列信息設(shè)計(jì)引物。

4. 根據(jù)所選擇的慢病毒載體構(gòu)建相應(yīng)的siRNA表達(dá)載體。

5. 在完成相應(yīng)的試驗(yàn)后，我們將為您提供一套完整的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其中包括：實(shí)驗(yàn)操作說明、電子版的測序結(jié)果及彩圖、構(gòu)建好的siRNA慢病毒表達(dá)載體質(zhì)粒及其甘油菌等。

選擇合肥星肽生物科技有限公司的理由

生產(chǎn)實(shí)力雄厚

合肥星肽生物科技有限公司擁有近2000平方米獨(dú)立研發(fā)中心以及無菌實(shí)驗(yàn)室4條完善的多肽生產(chǎn)線，單月可交貨3000條多肽精品，生產(chǎn)研發(fā)速度快，可快速相應(yīng)您的需求。

技術(shù)設(shè)備先進(jìn)

合肥星肽生物科技有限公司實(shí)驗(yàn)室配備了waters LC-MA/MS、waters uplc，waters全自動(dòng)純化儀、島津LCMS、全自動(dòng)凍干系統(tǒng)、紫外分光光度計(jì)等專用精密儀器，為您提供高效專業(yè)的技術(shù)服務(wù)。

客戶服務(wù)完善

合肥星肽生物科技有限公司廣大客戶提供專業(yè)的前沿產(chǎn)品、合理的價(jià)格、便捷的物流服務(wù)，幫助客戶縮短科研周期、節(jié)省試驗(yàn)成本，使客戶的科學(xué)研究具有持續(xù)性。

關(guān)于合肥星肽生物科技有限公司

合肥星肽生物科技有限公司是一家致力于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的高科技企業(yè)，公司地址位于科教名城———合肥市。公司主營多肽合成、多肽定制、多肽純化等多肽制備多肽技術(shù)服務(wù)。在合肥市與中科院的關(guān)懷下，2021年初合肥市高新區(qū)與中科院分別與合肥星肽生物科技有限公司簽訂了戰(zhàn)略投資協(xié)議。 公司位于合肥市高新區(qū)安徽中科資城創(chuàng)業(yè)孵化器A區(qū)，擁有2000平方米獨(dú)立研發(fā)中心以及無菌實(shí)驗(yàn)室，四條完善的多肽生產(chǎn)線，配備了Waters LC- MS/MS、Waters UPLC、Waters 全自動(dòng)純化儀、島津LCMS、全自動(dòng)凍干系統(tǒng)、紫外分光光度計(jì)等專用精密儀器保障合肥星肽生物科技有限公司月產(chǎn)3000條精品多肽的生產(chǎn)能力，這些得以讓我們可以為客戶快速準(zhǔn)確的提供各種高質(zhì)量的多肽產(chǎn)品及服務(wù)。 合肥合肥星肽生物科技有限公司始終致力于為您的實(shí)驗(yàn)研究提供高品質(zhì)、穩(wěn)定性良好的產(chǎn)品，“做您身邊的多肽合成專家”一直是每個(gè)合肥星肽生物科技有限公司人的目標(biāo)與方向，勵(lì)志作為多肽合成行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的風(fēng)向標(biāo)。公司擁有100余人的專業(yè)團(tuán)隊(duì)，其中博士研究生、碩士研究生10余人。在此基礎(chǔ)上公司配備了一套包含從售前到售后的專業(yè)團(tuán)隊(duì)，力爭做到每個(gè)環(huán)節(jié)都“清晰明了”，對每一個(gè)問題都“吹毛求疵”，讓您的實(shí)驗(yàn)變得更加簡單，正是憑借這樣的信仰和扎實(shí)的多肽合成技術(shù)優(yōu)勢，合肥星肽生物科技有限公司已經(jīng)成為國內(nèi)外高校與眾多生物醫(yī)藥企業(yè)誠信的合作伙伴和堅(jiān)強(qiáng)的技術(shù)后盾。 公司秉承“專業(yè)鍛造品質(zhì)，服務(wù)打造市場”的經(jīng)營理念，為國內(nèi)廣大客戶提供專業(yè)的前沿產(chǎn)品、合理的價(jià)格、便捷的物流服務(wù)。 公司自成立以來，一直致力于多肽合成、多肽定制、多肽純化等多肽制備多肽技術(shù)服務(wù)的研究。幫助客戶縮短科研周期、節(jié)省試驗(yàn)成本，使客戶的科學(xué)研究具有持續(xù)性。 實(shí)驗(yàn)室配備一支年輕、專業(yè)、富有創(chuàng)造精神且經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)團(tuán)隊(duì)。 合肥星肽生物科技有限公司目前跟國內(nèi)外企業(yè)有著友好的合作往來。斯坦福大學(xué)，牛津大學(xué)，北京大學(xué)，清華大學(xué)，天津大學(xué)，浙江大學(xué)，中科大，香港理工大學(xué)，以及中科院遺傳所，過程所，化學(xué)所，生物細(xì)胞所，微生物所等，北京軍科院**醫(yī)學(xué)研究所，武漢病毒研究所等有穩(wěn)定合作。

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